Judanti fazė prilygsta skystajai kraujo fazei, o naudojant reikia atkreipti dėmesį į įvairius dalykus. Tarp jų yra keletas „spąstų“, į kuriuos reikia atkreipti dėmesį.
01. Pridėjus organinio tirpiklio, išmatuokite judriosios fazės pH
Jei pH matuojate su organiniu priedu, gaunamas pH bus kitoks nei prieš įdedant organinio tirpiklio. Tačiau svarbiausia yra būti nuosekliems. Jei pH visada matuojate pridėję organinio tirpiklio, būtinai nurodykite veiksmus, kuriuos naudojate, kad kiti laikytųsi to paties metodo. Šis metodas nėra 100% tikslus, bet bent jau išlaikys metodą nuoseklų. Tai gali būti svarbiau nei gauti tikslią pH vertę.
02. Buferis nenaudojamas
Buferio paskirtis – kontroliuoti pH ir neleisti jam keistis. Daugelis kitų metodų keičia judriosios fazės pH, todėl gali pasikeisti sulaikymo laikas, smailės forma ir didžiausias atsakas.
Skruzdžių rūgštis, TFA ir kt. nėra buferiai
03. Nenaudojamas buferis normaliame pH diapazone
Kiekvienas buferis turi 2 pH vienetų diapazono plotį, kuriame jis užtikrina geriausią pH stabilumą. Buferiai už šio lango neužtikrins veiksmingo atsparumo pH pokyčiams. Naudokite tinkamo diapazono buferį arba pasirinkite buferį, kuris apima jums reikalingą pH diapazoną.
04. Į organinį tirpalą įpilkite buferio
Sumaišius buferinį tirpalą su organine faze, buferis greičiausiai nusodins. Daugeliu atvejų, net jei krituliai iškrito, juos vis tiek sunku aptikti. Nepamirškite, kad į vandeninę fazę visada įpilkite organinio tirpalo, nes tai gali labai sumažinti buferinio nuosėdų tikimybę.
05. Sumaišykite koncentracijos gradientą nuo 0% su siurbliu
Šiuolaikiniai siurbliai gali efektyviai maišyti judančias fazes ir ištuštinti, bet ne visi, naudojantys jūsų metodą, turės aukštos kokybės siurblį. Sumaišykite A ir B į vieną tirpalą ir paleiskite jį 100 %.
Pavyzdžiui, 950 ml organinio pradinio mišinio galima paruošti sumaišius su 50 ml vandens. To pranašumas yra tas, kad jis gali sumažinti HPLC kintamumą ir sumažinti burbuliukų bei kritulių susidarymo sistemoje galimybę. Verta pažymėti, kad pompos mišinio santykis yra 95:5, o tai nereiškia, kad iš anksto sumaišyto sulaikymo laikas butelyje taip pat yra 95:5.
06. Buferiui pakeisti nenaudojama tinkama modifikuota rūgštis (bazė).
Naudokite tik tą rūgštį arba bazę, kuri sudaro jūsų naudojamą buferinę druską. Pavyzdžiui, natrio fosfato buferis turi būti ruošiamas tik su fosforo rūgštimi arba natrio hidroksidu.
07. Metode nenurodoma visa informacija apie buferį, pvz., pridedama 5 gnatrio fosfatas 1000 ml vandens.
Buferio tipas nustato pH diapazoną, kurį galima buferizuoti. Reikiama koncentracija lemia buferio stiprumą. 5 gramai arba bevandenio natrio fosfato ir 5 gramai mononatrio fosfato monohidrato turi skirtingą buferio stiprumą.
08. Organinių tirpiklių pridėjimas prieš tikrinant
Jei ankstesnis metodas naudojo buferinį tirpalą pradinei linijai B, o jūsų metodas naudojo organinį tirpalą bazinei linijai B, tikėkimės, kad galite nusodinti buferį siurblio vamzdeliuose ir siurblio galvutėje.
09. Pakelkite buteliuką ir ištuštinkite paskutinį lašą
Yra didelė tikimybė, kad jums neužteks mobiliosios fazės visam bėgimui ir jūsų mėginys rūkys. Be galimybės sudeginti siurblio sistemą ir kolonėlę, mobilioji fazė visiškai išgaruos ir pasikeis mobilioji fazė butelio viršuje.
10. Naudokite ultragarso degazavimo mobiliąją fazę
Svarbiausias dalykas yra įsitikinti, kad visos buferinės druskos yra ištirpusios, tačiau tai yra blogiausias būdas degazuoti ir greitai įkaitins judriąją fazę, todėl organiniai komponentai išgaruos. Kad vėliau išvengtumėte nereikalingų rūpesčių, skirkite penkias minutes ir išsiurbkite mobiliąją fazę.
Paskelbimo laikas: 2024-08-27